靶点：PI3K 通路：PI3K/Akt/mTOR 背景说明：ZSTK474 是一种 ATP 竞争性的泛 I 类 PI3K 抑制剂。 生物活性：ZSTK474 是一种 ATP 竞争性的泛 I 类 PI3K 抑制剂，抑制 P13Kα，PI3Kβ，PI3Kδ 和 PI3Kγ，IC50 分别为 16 nM，44 nM，4.6 nM 和 49 nM。[1-3] In Vitro：Lineweaver-Burk图分析显示ZSTK474以ATP竞争性方式抑制所有四种PI3K同种型。对于四种PI3K同种型确定的Ki值显示ZSTK474最有效地抑制PI3Kδ同种型，Ki为1.8nM，而其他同种型被抑制，Ki值高4-10倍。因此，ZSTK474应被视为泛PI3K抑制剂。我们还确定了用ZSTK474和LY294002抑制四种PI3K同种型的IC50值。 ZSTK474的IC50值(分别为16，44，4.6和49 nM，分别为PI3Kα，PI3Kβ，PI3Kδ和PI3Kγ)与Ki值一致(PI3Kα，PI3Kβ，PI3Kδ和PI3Kα为6.7，10.4，1.8和11.7 nM)。分别为PI3Kγ)，它进一步支持了ZSTK474最有效地抑制PI3Kδ的观点。即使浓度为100μM，ZSTK474也会相当弱地抑制mTOR活性[1]。 In Vivo：在经受MCAO的小鼠中，以50，100，200和300mg/kg的剂量测试用ZSTK474处理。由于200mg/kg剂量产生显著改善并且没有明显的毒性作用(P <0.01)，因此在本研究的其余实验期间，小鼠在每天200mg/kg /天的剂量下用ZSTK474治疗三次MCAO后日。 。在患有MCAO的小鼠中检查神经功能，然后再灌注24，48和72小时。在ZSTK474组中，除角点试验外，神经功能评分明显优于对照组[2]。 动物实验：小鼠[2]小鼠随机分配接受不同剂量的ZSTK474(50，100，200和300 mg/kg)以确定最佳剂量;在我们的实验中，最佳剂量为200 mg/kg。然后将小鼠随机分配到三组中的一组：假手术组(磷酸盐缓冲盐水，PBS);对照组(MCAO + PBS); ZSTK474治疗组(MCAO + ZSTK474)。在ZSTK474治疗组中，给予小鼠200mg/kg ZSTK474的最佳剂量。在假手术组和对照组中，给予小鼠等量的PBS。所有小鼠每天通过口服管饲法接受相同剂量，从局灶性缺血发作后6小时开始并持续两天，即总共3天。 激酶实验：每个动力学反应的线性相定义为各自的酶量(分别为PI3Kα，PI3β，PI3δ和PI3γ分别为0.05，0.1，0.12和1μg/ mL)和反应时间(20分钟)。在增加浓度的ZSTK474存在下，在各种浓度的ATP(5，10，25，50，100μM)下测定PI3K活性。通过绘制1/v(v的倒数，其中v是通过从负酶对照的HTRF信号中减去激酶测试样品的HTRF信号获得)与1/[ATP]的关系来绘制Lineweaver-Burk图(ATP浓度的倒数)。对于负酶对照，在不存在激酶的情况下将PIP2与ATP一起温育。为了确定每种PI3K同种型的ZSTK474的Ki值(抑制常数)，相应的Lineweaver-Burk图的斜率相对于ZSTK474浓度重新绘制。使用GraphPad Prism 4 [1]通过分析计算Ki值。 数据来源文献：[1]. Kong D， et al. ZSTK474 is an ATP-competitive inhibitor of class I phosphatidylinositol 3 kinase isoforms. Cancer Sci， 2007， 98(10)， 1638-1642. [2]. Wang P， et al. Class I PI3K inhibitor ZSTK474 mediates a shift in microglial/macrophage phenotype and inhibits inflammatory response in mice with cerebral ischemia/reperfusion injury. J Neuroinflammation. 2016 Aug 22;13(1):192. [3]. Liu F， et al. Prolonged inhibition of class I PI3K promotes liver cancer stem cell expansion by augmenting SGK3/GSK-3β/β-catenin signalling. J Exp Clin Cancer Res. 2018 Jun 25;37(1):122.
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