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靶点：AMPK
通路：PI3K/Akt/mTOR;Epigenetics
背景说明：Dorsomorphin Dihydrochloride是一种有效,选择性和 ATP 竞争性的 AMPK 抑制剂。
生物活性：Dorsomorphin dihydrochloride是一种有效，选择性和 ATP 竞争性的 AMPK 抑制剂，Ki 为109±16 nM。[1-4]
In Vitro：在2DG应力下，用10μMDorsomorphin处理HT1080细胞2小时。免疫印迹分析显示，通过将HT1080细胞暴露于2DG，AMPK的催化α亚基的磷酸化水平增加，而当添加Dorsomorphin时，基础和2DG诱导的磷酸化水平明显降低。使用基于ELISA的测定系统测量细胞激酶活性证实，无论细胞培养条件如何，Dorsomorphin都会降低内源性AMPK活性[2]。
In Vivo：在24小时内施用Dorsomorphin导致总血清铁浓度增加60％。因此，Dorsomorphin治疗可有效降低成人小鼠铁调素表达的基础水平并增加血清铁浓度[3]。
细胞实验：在存在或不存在10mM 2DG或1μg/ mL衣霉素作为应激源的情况下，用不同浓度的Dorsomorphin(0，0.3，1，3，10μM)，Versipelostatin和苯乙双胍处理HeLa和786-O细胞。 h在96孔板中。对于组合研究，在存在或不存在10mM 2DG的情况下，用各种浓度的UPR抑制剂处理786-O细胞24小时。然后用新鲜生长培养基替换培养基，并将细胞再培养15小时。随后，将MTT添加到培养基中，并确定每个孔的吸光度。对于在葡萄糖戒断条件下的活力测定，在存在或不存在葡萄糖的情况下，在12孔板中用不同浓度的Dorsomorphin和苯乙双胍处理HT1080细胞18小时，接种在96孔板中的生长培养基中，然后培养。再添加MTT前48小时。通过将来自未处理细胞的每个对照吸光度设定为100％来计算相对细胞存活率(一式四份测定的平均值±SD)。使用等效线法[2]分析药物组合在产生80％细胞生长抑制(IC80)的浓度下的作用。
动物实验：小鼠[3]在标准饮食中饲养的12周龄C57BL / 6小鼠通过尾静脉注射0.2g / kg葡聚糖或0.2g / kg铁 - 葡聚糖USP。葡聚糖仅注射载体，而铁 - 葡聚糖注射载体或Dorsomorphin(10mg / kg)。注射后1小时，杀死小鼠并将肝脏片段收集在500μLSDS-裂解缓冲液中并机械均化。通过SDS-PAGE分离20μL肝脏提取物并进行免疫印迹。使用来自机械均质化的小鼠肝脏的Trizol收获总RNA(注射后6小时，单次腹膜内剂量的Dorsomorphin(10mg / kg)或DMSO)。
激酶实验：将HT1080细胞接种在24孔板(每孔2×10 4个细胞)中，并在存在或不存在葡萄糖或10mM 2DG的情况下用Dorsomorphin处理2小时。通过在6孔板中转染质粒DNA(pAMPKα1-wt，pAMPKα1-D168A和pcFlag作为对照)，在24孔板中接种并用UPR抑制剂处理来制备过表达野生型和显性失活AMPKα1的HT1080细胞。用细胞裂解缓冲液(20mM Tris-HCl，pH 7.5，250mM NaCl，10％甘油，0.5％NP-40，1mM EDTA，1mM EGTA，0.2mM PMSF，1μg/ mL胃蛋白酶抑制剂，0.5)裂解细胞。 μg/ mL亮抑酶肽，5mM NaF，2mM Na 3 Vo4，2mMβ-甘油磷酸盐，1mM DTT)。使用CycLex AMPK激酶测定试剂盒[2]测定对照样品(在正常生长条件下的载体或pcFlag)的相对AMPK激酶活性(重复测定的平均值±SD)。
数据来源文献：[1]. Zhou G， et al. Role of AMP-activated protein kinase in mechanism of metformin action. J Clin Invest. 2001 Oct; 108 (8) :1167-74.
[2]. Saito S， et al. Compound C prevents the unfolded protein response during glucose deprivation through a mechanism independent of AMPK and BMP signaling. PLoS One. 2012; 7 (9) :e45845.
[3]. Yu PB， et al. Dorsomorphin inhibits BMP signals required for embryogenesis and iron metabolism. Nat Chem Biol. 2008 Jan; 4 (1) :33-41.
[4]. Zhang DY， et al. Role of autophagy and its molecular mechanisms in mice intestinal tract after severe burn. J Trauma Acute Care Surg. 2017 Oct; 83 (4) :716-724
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| 其它标识： |
MDL：MFCD11112197
SMILES：[H]Cl.[H]Cl.C12=C(C3=CC=NC=C3)C=NN1C=C(C4=CC=C(OCCN5CCCCC5)C=C4)C=N2
InChIKey：RJDVIJJQKMGPMV-UHFFFAOYSA-N
InChI：InChI=1S/C24H25N5O.2ClH/c1-2-12-28(13-3-1)14-15-30-22-6-4-19(5-7-22)21-16-26-24-23(17-27-29(24)18-21)20-8-10-25-11-9-20;;/h4-11,16-18H,1-3,12-15H2;2*1H
PubChem CID：49761481
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| 基本信息： |
CAS：1219168-18-9
英文名称：Dorsomorphin dihydrochloride
别名：CompoundCdihydrochloride;BML-275
分子式：C24H25N5O·2HCl
分子量：472.41
规格：10mM*1mL in Water ; 5mg
溶解性：Soluble in Water
纯度：≥98%
外观(性状)：Light yellow to yellow Solid
储存条件：Powder:2-8℃，2 years;Insolvent(母液):-20℃，6 months;-80℃，1 year
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| 靶点： |
AMPK |
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