| 生物活性： |
靶点：mTOR
通路：PI3K/Akt/mTOR
背景说明：AZD-8055 是一种ATP竞争性的 mTOR 抑制剂。
生物活性：AZD-8055 是一种ATP竞争性的 mTOR 抑制剂，IC50 为 0.8 nM。AZD-8055 抑制 mTORC1 和 mTORC2。[1-3]
In Vitro：使用两种不同的测定评估AZD-8055(AZD8055)对mTOR的抑制活性。使用截短的重组mTOR酶，AZD8055的IC 50为0.13±0.05nM。使用从HeLa细胞提取的天然mTOR酶复合物，IC50为0.8±0.2nM。 AZD-8055对所有I类PI3K同种型和PI3K样激酶家族的其他成员显示出优异的选择性(~1，000倍)。 AZD-8055抑制mTORC1底物p70S6K和4E-BP1的磷酸化以及mTORC2底物AKT和下游蛋白的磷酸化。对于pAKT Ser473，AZD8055的细胞IC50计算为24±9nM(n = 13)，对于MDA-MB-468细胞中的pS6Ser235/236计算为27±3nM(n = 12)[1]。
In Vivo：在携带U87-MG(PTEN )胶质母细胞瘤异种移植物的小鼠中，用AZD-8055(AZD8055)口服治疗导致剂量依赖性肿瘤生长抑制为33％，48％和77％，2.5，5和10mg/kg/d每天两次。在携带A549异种移植物的裸鼠中观察到类似的剂量依赖性：分别在2.5，5和10mg/kg/d每天两次后，肿瘤生长抑制分别为44％，55％和93％。当以10mg/kg每天两次或每天以20mg/kg的剂量给药时，AZD8055还导致乳腺癌，肺癌，结肠癌，前列腺癌和子宫异种移植物模型中肿瘤生长和/或消退的显著抑制[1]。 AZD8055显著降低mTOR及其底物的磷酸化水平和体内小胶质细胞的活化，并促进从M1表型到M2表型的小胶质细胞极化。此外，蛛网膜下腔出血(SAH)后AZD8055的使用可显著改善EBI，包括神经细胞凋亡，神经元坏死，脑水肿和血脑屏障通透性[2]。
细胞实验：对于生长抑制和吖啶染色，将细胞暴露于增加浓度的AZD-8055(0至1，280nM)72至96小时并染色细胞核(0.03mg/mL Hoechst 33342)和酸性囊泡(1μg/ mL吖啶)橙子)。在ArrayScan II平台上以450和536nm捕获图像，并且量化酸性囊泡的百分比和细胞数量。对于LC3评估，在与AZD8055孵育之前，将细胞暴露于e64d /胃蛋白酶抑制剂(10μg/ mL)30至90分钟。将细胞在冰上裂解并通过免疫印迹分析[1]。
动物实验：小鼠[1]以0.1mL的体积皮下注射肿瘤细胞(U87-MG为106，A549为5×106)，当肿瘤大小达到0.2cm 3时，将小鼠随机分为对照组和治疗组。 AZD-8055通过口服强饲法(0.1mL/10g体重)每日一次或两次给药。对照组仅接收车辆。在研究期间每周两次记录肿瘤体积(通过厚度测量)，动物体重和肿瘤状况。计算肿瘤体积。使用大鼠[2] Sprague-Dawley(SD)大鼠(250g)和妊娠SD大鼠(妊娠16-18天，用于小胶质细胞提取)。在实验1中，将48只大鼠(使用54只大鼠，48只大鼠在手术后存活)随机分为4组：假手术组，SAH 3小时组，SAH 24小时组，SAH 72小时组。 SAH 3小时，24小时和72小时组的动物进行实验性SAH，并分别在注射后3小时，24小时和72小时处死(每组n = 12)。在实验2中，将72只大鼠(使用83只大鼠，72只大鼠在手术后存活)随机分配到假手术组(n = 18)，SAH +媒介物组(n = 18)，SAH +雷帕霉素组(n = 18)。，SAH + AZD8055组(n = 18)。在诱导SAH后立即大鼠接受单次腹膜内注射雷帕霉素，所用雷帕霉素的剂量为150μg/ kg体重。 AZD8055通过口服强饲法给药，剂量为14mg/kg体重。载体组中的大鼠用等体积溶剂处理。实验2中的所有大鼠在SAH后24小时被杀死。在实验3中，将富集的小胶质细胞分成5组：对照，OxyHb，OxyHb +载体(DMSO)，OxyHb +雷帕霉素和OxyHb + AZD8055。在小胶质细胞再接种后24小时，在新鲜培养基中分别用OxyHb(10μM)，DMSO(体积等于雷帕霉素和AZD8055)，雷帕霉素(2.74mM)，AZD8055(0.8nM)处理细胞。在温育24小时(在37℃，5％CO 2中)后，除去细胞培养基，用PBS洗涤3次并用4％多聚甲醛固定。
激酶实验：使用两种方法评估mTOR的抑制：高通量测定使用α筛选捕获复合物技术，其具有重组截短的FLAG标记的mTOR(氨基酸1362-2549;在HEK293细胞中表达)和生物素化的p70肽底物。此外，使用来自HeLa细胞质提取物的全长mTOR的免疫沉淀测定天然mTOR活性，并且内源性mTOR与Rictor和Raptor在蛋白质复合物中。在作为底物的重组4E-BP1蛋白存在下进行激酶测定，通过ELISA形式检测磷酸化产物。使用脂质PIP2作为底物的重组PI3K测量脂质激酶，I类PI3Ksα，β，δ和γ的活性。进行共济失调 - 毛细血管扩张症突变(ATM)和DNA-PK的测定。最后，针对260种激酶的反筛选以10μMAZD-8055的固定浓度进行[1]。
数据来源文献：[1]. Chresta CM， et al. AZD8055 is a potent， selective， and orally bioavailable ATP-competitive mammalian target of rapamycin kinase inhibitor with in vitro and in vivo antitumor activity. Cancer Res， 2010， 70(1)， 288-298.
[2]. You W， et al. Inhibition of mammalian target of rapamycin attenuates early brain injury through modulating microglial polarization after experimental subarachnoid hemorrhage in rats. J Neurol Sci. 2016 Aug 15;367:224-31.
[3]. Kawata T， et al. Dual inhibition of the mTORC1 and mTORC2 signaling pathways is a promising therapeutic target for adult T-cell leukemia. Cancer Sci. 2017 Oct 27.
|
| 其它标识： |
MDL：MFCD16660191
SMILES：OCC1=CC(C2=NC3=NC(N4CCOC[C@@H]4C)=NC(N5[C@@H](C)COCC5)=C3C=C2)=CC=C1OC
|
| 基本信息： |
CAS：1009298-09-2
英文名称：AZD 8055
别名：5-[2,4-双[(3S)-3-甲基-4-吗啉]吡啶并[2,3-d]嘧啶-7-基]-2-甲氧基苯甲醇
分子式：C25H31N5O4
分子量：465.54
规格：50mg ; 5mg ; 10mM*1mL in DMSO ; 10mg ; 100mg
溶解性：Soluble in DMSO
纯度：≥98%
外观(性状)：Light yellow to yellow Solid
储存条件：Powder:-20℃，2 years;Insolvent(母液):-20℃，6 months;-80℃，1 year
|
| 靶点： |
mTOR |
扫一扫关注我们
