靶点：PERK 通路：ER Stress;Cell Cycle 背景说明：GSK2656157 是选择性,ATP竞争性的 PERK 抑制剂。 生物活性：GSK2656157 是选择性，ATP竞争性的 PERK 抑制剂，IC50 值为 0.9 nM[1-4]。 In Vitro：GSK2656157抑制LPS诱导的IL-1β产生，LPS诱导的Caspase 1活化和LPS诱导的eIF-2α磷酸化，但不抑制LPS诱导的TNF-α产生[3]。GSK2656157导致PERK活化的抑制以及下游底物，磷酸-eIF2α，ATF4和CHOP的降低，在BxPC3胰腺肿瘤细胞系中IC50在10-30nM的范围内。在UPR诱导之前暴露于1μMGSK2656157的细胞能够阻止这种对从头蛋白质合成的影响[1]。 GSK2656157引起另一种eIF2α激酶的激活以补偿HT1080细胞中PERK活性的丧失。 GSK2656157抑制HT1080细胞的生长[2]。 In Vivo：GSK2656157(1.5-150mg/kg，po)导致磷酸-PERK Thr980的剂量依赖性抑制，在50和150mg/kg时抑制超过80％。 GSK2656157(50-150mg/kg，po)导致人肿瘤异种移植模型中肿瘤生长的剂量依赖性抑制[1]。 细胞实验：将BxPC3细胞用DMSO或1μMGSK2656157处理1小时，然后再加入5μg/ mL衣霉素一小时。细胞用125μCi35S-甲硫氨酸代谢标记随后1小时。在冷RIPA缓冲液中裂解细胞，通过SDS-PAGE分离裂解物，然后暴露于磷成像仪筛。对照细胞也用100μM环己酰胺预处理1小时，然后进行代谢标记。 动物实验：将指数生长的HPAC(5×106细胞/小鼠)，Capan-2(10×106细胞/小鼠)或NCI-H929(1×6细胞/小鼠)细胞皮下植入8-12-右侧。一周龄雌性SCID小鼠。类似地，将每只小鼠10×106个BxPC3细胞植入雌性裸鼠中。当肿瘤大小达到约200mm 3时，称重动物，并根据肿瘤大小随机分组到每组8只小鼠的治疗组中。小鼠口服给药配方载体或GSK2656157。称重小鼠并用卡尺每周两次测量肿瘤。计算肿瘤体积。使用下式计算肿瘤测量的每一天的肿瘤生长抑制百分比：100×[1-(化合物处理的肿瘤的平均生长/载体处理的对照肿瘤的平均生长)]。 激酶实验：用DMSO或不同浓度的GSK2656157处理BxPC3(人胰腺癌)或LL/2(鼠肺癌)细胞1小时，然后加入5μg/ mL衣霉素或1μM毒胡萝卜素另外6小时以诱导内质网应激。在冷放射免疫沉淀测定(RIPA)缓冲液[150mM NaCl，50mM Tris-Cl pH 7.5，0.25％脱氧胆酸钠，1％NP-40，蛋白酶抑制剂和100mM原钒酸钠]中裂解细胞。通过SDS-PAGE分离澄清的裂解物，并使用NuPAGE系统转移至硝酸纤维素膜。将印迹与抗PERK，p-eIF-2αSer51，总eIF-2α，ATF4和CHOP的抗体一起温育。 IRDye700DX标记的山羊抗小鼠免疫球蛋白G(IgG)，IRDye800-CW驴抗山羊IgG和IRDye800-CW山羊抗兔IgG用作二抗。在Odyssey红外成像仪上检测蛋白质。 数据来源文献：[1]. Atkins C， et al. Characterization of a novel PERK kinase inhibitor with antitumor and antiangiogenic activity. Cancer Res. 2013 Mar 15;73(6):1993-2002. [2]. Krishnamoorthy J， et al. Evidence for eIF2α phosphorylation-independent effects of GSK2656157， a novel catalytic inhibitor of PERK with clinical implications. Cell Cycle. 2014 Mar 1;13(5):801-6. [3]. Ando T， et al. GSK2656157， a PERK inhibitor， reduced LPS-induced IL-1β production through inhibiting Caspase 1 activation in macrophage-like J774.1 cells. Immunopharmacol Immunotoxicol. 2016 Aug;38(4):298-302. [4]. Zhao Q， et al. Thioredoxin-interacting protein links endoplasmic reticulum stress to inflammatory brain injury and apoptosis after subarachnoid haemorrhage. J Neuroinflammation. 2017 May 11;14(1):104.
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