靶点：PKCβ 通路：TGF-beta/Smad;Epigenetics 背景说明：Enzastaurin 是一种有效的 PKCβ 抑制剂。 生物活性：Enzastaurin 是一种有效的 PKCβ 抑制剂，IC50 值为 6 nM；对其选择性是对 PKCα，PKCγ 和 PKCε 的 6-20 倍[1-3]。 IC50：PKCα:39nM;PKCβ:6nM;PKCγ:83nM;PKCε:110nM [1-3] In Vitro：Enzastaurin增加CTCL恶性淋巴细胞的凋亡。当与GSK3抑制剂组合时，enzastaurin表现出细胞毒性水平的增强。用enzastaurin和GSK3抑制剂AR-A014418的组合治疗导致β-连环蛋白总蛋白和β-连环蛋白介导的转录水平增加。阻断β-catenin介导的转录或β-连环蛋白的小发夹RNA(shRNA)敲低诱导与enzastaurin加AR-A014418相同的细胞毒性作用。此外，用enzastaurin和AR-A014418治疗可降低CD44的mRNA水平和表面表达[1]。在所研究的所有MM细胞系中，包括MM.1S，MM.1R在内，使用鼻腔毒素对生长具有显著的剂量依赖性抑制作用，RPMI 8226(RPMI)，RPMI-Dox40(Dox40)，NCI-H929，KMS-11，OPM-2和U266，IC50为0.6-1.6μM。 Enzastaurin直接影响人体肿瘤细胞，诱导细胞凋亡并抑制培养肿瘤细胞的增殖。 Enzastaurin还抑制GSK3βser9，核糖体蛋白S6S240/244和AKTThr308的磷酸化，而对VEGFR磷酸化没有直接影响[3]。 In Vivo：用Enzastaurin和放射治疗异种移植物比单独使用任何一种治疗产生更大的微血管密度降低。微血管密度的下降对应于肿瘤生长延迟[2]。 细胞实验：通过核小体片段化和末端脱氧核苷酸转移酶介导的切口末端标记(TUNEL)和HCT116和U87MG细胞系中的染色来测量enzastaurin对细胞凋亡的诱导。简而言之，在96孔板(1％FBS补充的培养基条件)中每孔接种5×103个细胞，与或不与Enzastaurin一起孵育48至72小时。将吸光度值标准化为来自对照处理细胞的吸光度值，以根据制造商的方案得到所有浓度的核小体富集因子。研究的浓度范围为0.1至10μM。用原位细胞死亡检测荧光素试剂盒测定原位TUNEL染色。将细胞(7.5×10 4)每孔接种在6孔板中，并在1％FBS补充的培养基Enzastaurin中孵育72小时。用BD epics流式细胞仪检测荧光素标记的DNA链断裂。每次测试收集一万个单细胞FITC染色事件。 激酶实验：使用测量33P掺入髓鞘碱性蛋白质底物的滤板测定形式测定enzastaurin对PKCβII，PKCα，PKCε或PKCγ活性的抑制。反应在96孔聚苯乙烯板中以100μL反应体积进行，最终条件如下：90mM HEPES(pH 7.5)，0.001％Triton X-100，4％DMSO，5mM MgCl2，100μMCaCl2，0.1mg/mL磷脂酰丝氨酸，5μg/ mL双乙酰甘油，30μMATP，0.005μCi/μL33ATP，0.25 mg/mL髓鞘碱性蛋白，enzastaurin(1-2，000 nM)系列稀释液，重组人PKCβII，PKCα，PKCε或PKCγ酶(分别为390，169，719或128pM)。通过加入酶开始反应，并在室温下温育60分钟。然后将它们用10％H 3 PO 4淬灭，转移至多筛选阴离子磷酸纤维素96孔过滤板，温育30至90分钟，过滤并在真空歧管上用4体积的0.5％H 3 PO 4洗涤。加入闪烁混合物并在Microbeta闪烁计数器上读板。通过使用ActivityBase 4.0将三变量逻辑方程拟合至10点剂量反应数据来确定IC 50值。 数据来源文献：[1]. Rovedo MA， et al. Inhibition of glycogen synthase kinase-3 increases the cytotoxicity of enzastaurin. J Invest Dermatol， 2011， 131(7)， 1442-1449. [2]. Podar K， et al. Targeting PKC in multiple myeloma: in vitro and in vivo effects of the novel， orally available small-molecule inhibitor enzastaurin (LY317615.HCl). Blood， 2007， 109(4)， 1669-1677. [3]. Graff JR， et al. The protein kinase Cbeta-selective inhibitor， Enzastaurin (LY317615.HCl)， suppresses signaling through the AKT pathway， induces apoptosis， and suppresses growth of human colon cancer and glioblastoma xenografts. Cancer Res， 2005， 65(16)，
扫一扫关注我们
