靶点：IL-6，BRD4，MYC 通路：Epigenetics 背景说明：CPI-203 是一种强效的BET bromodomain抑制剂。 生物活性：CPI-203 是一种有效的，选择性的，细胞通透的 BET bromodomain 抑制剂，抑制 BRD4，IC50 值约为 37 nM。[1-2] In Vitro：CPI203在体外和细胞中抑制BRD4，但在体外不影响BRD4激酶活性[1]。 CPI203在分析的所有9种MCL细胞系中发挥细胞抑制作用，GI50范围为0.06至0.71μM，在来自健康供体的正常PBMC中具有低细胞毒性。此外，来那度胺和CPI203通过靶向IRF4和MYC，有效激活了对硼替佐米耐药的MCL细胞的细胞死亡程序[2]。 In Vivo：BRD4在体内介导CTD Ser2磷酸化[1]。在REC-1荷瘤小鼠中，来那度胺与CPI203(2.5 mg / kg，ip)的组合通过消除MYC和IRF4表达以及诱导凋亡来协同增强每种单一药剂的抗肿瘤特性[2]。 细胞实验：将MCL原代细胞(1.5×105)和细胞系(4×104)与来那度胺和/或PI203一起温育。在分光光度测量之前，再加入MTT(3-(4，5-二甲基噻唑基-2)-2，5-二苯基溴化四唑溴化物)试剂2-6小时。每次测量一式三份。使用未处理的对照细胞作为参考表示值。 GI50计算为产生50％生长抑制的浓度。使用Calcusyn软件版本2.0计算组合指数(CI)。 动物实验：将CB17-严重联合免疫缺陷(SCID)小鼠皮下接种107个指定MCL细胞系的细胞，并如前所述监测肿瘤生长和生命参数。对于来那度胺和来那度胺 - 硼替佐米给药，将小鼠随机分配到每组3-4只小鼠的组中，并通过腹膜内注射每周两次剂量的硼替佐米(0.15mg / kg)，每日剂量的来那度胺(50mg / kg)，来那度胺和硼替佐米的组合，或等量的载体。在来那度胺-CPI203方案中，将总共22只REC-1荷瘤小鼠随机分配到5-6只小鼠的队列中，每天腹膜内注射2.5mg / kg CPI203，每日腹腔注射50mg /公斤来那度胺，两种药剂或等量的载体。接种后26至29天，根据机构指南杀死动物，并使用抗磷酸化组蛋白H3，切割的半胱天冬酶-3(5A1E)和MYC(D84C12)，IRF4(M-)的一抗对肿瘤样品进行免疫组织化学染色。 17)和血小板内皮细胞粘附分子-1(PECAM-1)(M20)，CD19(LE-CD19)，Blimp-1(克隆Ros195G / G5)，PAX5(克隆24)，CCL3和CD38，如前所述。使用Olympus DP70显微镜和Cell B Basic Imaging Software评估制剂。 激酶实验：BRD4，PTEFb和TFIIH的体外激酶测定在20μL50mM Tris，pH 7.5，5mM DTT，5 mM MnCl2和5 mM MgCl2中用10μCiγ32PATP(6，000 Ci / mM)和/或40进行指示μMATP。将激酶反应在30℃温育1小时，然后通过SDS / PAGE分离蛋白质;通过磷成像仪定量磷酸化的程度。对于动力学测量，将定量值绘制在Lineweaver-Burke图上以计算Vmax和Km值。当使用激酶抑制剂时，在激酶反应开始时加入适当稀释的抑制剂。用等体积的DMSO处理模拟处理的激酶反应。 数据来源文献：[1]. Devaiah BN， et al. BRD4 is an atypical kinase that phosphorylates serine2 of the RNA polymerase II carboxy-terminal domain. Proc Natl Acad Sci U S A. 2012 May 1;109(18):6927-32. [2]. Moros A， et al. Synergistic antitumor activity of lenalidomide with the BET bromodomain inhibitor CPI203 in bortezomib-resistant mantle cell lymphoma. Leukemia. 2014 Oct;28(10):2049-59.
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