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靶点：MDM-2/p53
通路：Apoptosis
背景说明：Nutlin 3a 是 Nutlin-3 的活性异构体,为一种MDM2拮抗剂,抑制 MDM2-p53 相互作用,且稳定 p53 蛋白,因此诱导细胞周期停滞和细胞凋亡。
生物活性：Nutlin-3a 是 Nutlin-3 的活性异构体，为一种鼠双微体 2 (MDM2) 拮抗剂，抑制 MDM2-p53 相互作用，且稳定 p53 蛋白，因此诱导细胞周期停滞和细胞凋亡[1-3]。
In Vitro：Nutlin-3a是Nutlin-3的活性对映体。 Nutlin-3a是一种高选择性MDM2拮抗剂和p53诱导剂。与10μMNutlin3a一起温育7天导致NIH/3T3细胞生长> 90％的抑制，但不影响MEF的增殖，其中药物的两个靶标都被消除。 Nutlin-3a有效地抑制所有细胞系中的细胞周期进展，使S期隔室耗尽至0.2-2％并增加G1期和G2期/ M期隔室，表明G1和G2停滞。 p53靶点p21和MDM2在Nutlin 3a加入后3小时显著升高，并在8小时达到最大水平。 Nutlin-3a在40小时后诱导约60％的SJSA-1和MHM细胞凋亡，60小时后分别增加(分别为85％和65％)[2]。Nutlin-3a是一种抑制MDM2，激活野生型p53并诱导细胞凋亡的治疗剂，作为TP53野生型卵巢癌的治疗化合物。具有野生型TP53的三种细胞系(HOC-7，OVCA429和A2780)对Nutlin 3a高度敏感(IC 50 = 4至6μM)。 SKOV3细胞对Nutlin 3a的IC50为38μM。两种具有TP53野生型的卵巢透明细胞系(TOV21G和OVAS)对Nutlin 3a的生长抑制(IC50分别为14和25μm)相对于TP53突变细胞系相对更敏感[1]。
In Vivo：Nutlin-3a在所有模型中均有效，平均肿瘤生长抑制≥98％。 Nutlin-3a以剂量依赖性方式抑制异种移植物生长，最高剂量(200mg/kg)显示出显著的肿瘤缩小(8个部分和1个完全消退)。已建立的SJSA-1和MHM骨肉瘤异种移植物与Nutlin-3a引起广泛的肿瘤消退[2]。
细胞实验：将所有15个细胞系以每孔1×10 3个细胞的密度接种在96孔板中。 24小时后，更换培养基并用递增浓度的Nutlin-3a(1μM，5μM，10μM，25μM，50μM和70μM)处理细胞。温育72小时后，向各孔中加入WST-1，以450nm的吸光度使用酶标仪，测定残留的活细胞数。根据需要用较小滴定的Nutlin-3a重复实验以确定细胞系的精确IC 50。 IC50已定义。再次以与上述相同的方式铺板细胞系，并用各自的IC50用Nutlin-3a处理，并在24，48和72h加入WST-1细胞活力测量[1]。
动物实验：小鼠[2]携带sc肿瘤异种移植物的裸鼠(在SJSA-1，LnCaP和22Rv1研究中每组10只小鼠，在MHM研究中每组15只小鼠)每天口服给予Nutlin-3a两次(50-200mg/kg)或载体(1％Klucel，0.1％吐温80)，持续2周(22Rv1和LnCap)或3周(SJSA-1和MHM)。用卡尺测量肿瘤体积并计算。对于Western印迹分析，具有已建立的SJSA-1肿瘤的裸鼠(200-400mm 3，每组三只动物用三剂量的Nutlin-3a以150mg/kg(0，8和24小时)处理，并且肿瘤是在最后一次剂量后3小时收获。肿瘤样品快速冷冻并加工[2]。
数据来源文献：[1]. Crane EK， et al. Nutlin-3a: A Potential Therapeutic Opportunity for TP53 Wild-Type Ovarian Carcinomas. PLoS One. 2015 Aug 6;10(8):e0135101.
[2]. Tovar C， et al. Small-molecule MDM2 antagonists reveal aberrant p53 signaling in cancer: implications for therapy. Proc Natl Acad Sci U S A. 2006 Feb 7;103(6):1888-93.
[3]. M Ulrich， et al. Murine tumor models for the in vivo evaluation of natural compounds and their derivatives as new cancer therapeutics. München. 2016.
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