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D-虫荧光素（D-Luciferin）是萤光素酶（Luciferase）的常用底物，普遍用于整个生物技术领域，特别是体内活体成像技术。在镁离子存在下荧光素酶使荧光素与ATP反应，接着它被氧化形成二氧杂环丁烷结构并发出黄绿色的光。Luciferin由luc基因编码，该基因作为报告基因在多种细胞中存在。由于化学发光的低背景性，luc基因在很低的表达水平下就可以被监测到。
应用：1）体外化学发光分析（in vitro）
2）活体成像实验（in vivo）
3）高灵敏度ATP分析。
使用说明（仅供参考）
体外发光检测
(1)用330.8µL无菌水溶解10 mg D-虫荧光素钠盐，配制成100 mM的储存液（200×）。
注：未使用的储存液建议分装储存在-20℃，避免反复冻融。
(2)用细胞培养基1∶200稀释储存液，得到1×萤光素工作液。
(3)去除培养细胞的培养基。
(4)向细胞内添加适量1×萤光素工作液，然后进行图像分析
注：在图像分析前，细胞在37℃短时间孵育后检测可增强信号。
活体成像分析
（1）用667 µL无菌的D-PBS(不含Mg2+、Ca2+ )溶解10 mgD-虫荧光素钠盐，得到D-虫荧光素钠盐工作液（15 mg/mL），0.2 µm滤膜过滤除菌。
（2）参照下表，根据不同的注射方式，注射不同的体积。
（3）注射入体内5-15min后，进行成像分析。
| 注射方式 | 注射剂量（仅供参考） |
| 静脉注射 | 按10 μL/g体重浓度，加入相应体积的15mg/mL萤光素工作液 |
| 腹腔注射 | 按10 μL/g体重浓度，加入相应体积的15mg/mL萤光素工作液 |
| 肌肉注射 | 50 μL，浓度为1–2 mg/mL萤光素工作液 |
| 鼻内注射 | 50 μL，浓度为3 mg/mL萤光素工作液 |
注意事项
1.工作液最终浓度建议根据不同实验体系进行优化。
2.荧光染料均存在淬灭问题，请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭。
3.为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
4.本产品仅供科研使用。请勿用于医药、临床诊断或治疗，食品及化妆品等用途。请勿存放于普通住宅区。
使用本产品的案例（仅供参考）
In Vivo
Mice（150 mg/kg D-fluorescein；intravenous/intraperitoneal injection）
To track transplanted cells in vivo, ERCs of passage 2 were transfected with a lentiviral vector that carried the ubiquitin promoter encoding luciferase with an optimum multiplicity of infection (MOI = 50). Then, ERCs were screened twice with 2mg/mL puromycin after transfection. As previously described, theFluc activity of different ERCs numbers and the fate of transplanted ERCs were observed in living colitis mice using the IVIS Lumina Imaging System.After intravenous/intraperitoneal injection of the reporter probe D- fluorescein (150 mg/kg, IL0230, Solarbio), the animals were photographed with the IVIS Lumina imaging system for 1- 10 min.Bioluminescence signal intensity images were analyzed and processed using live image software.
来源文献：Shao B, Ren SH, Wang ZB, Wang HD, Zhang JY, Qin H, Zhu YL, Sun CL, Xu YN, Li X, Wang H. CD73 mediated host purinergic metabolism in intestine contributes to the therapeutic efficacy of a novel mesenchymal-like endometrial regenerative cells against experimental colitis. Front Immunol. 2023 Apr 25;14:1155090. doi: 10.3389/fimmu.2023.1155090. PMID: 37180168;PMCID: PMC10167049.
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