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JC-10 是一种广泛用于检测线粒体膜电位△Ψm 的理想荧光探针。可以检测细胞、组织或纯化的线粒体膜电位。在线粒体膜电位较高时，JC-10 聚集在线粒体的基质中，形成聚合物，可以产生红色荧光；在线粒体膜电位较低时，JC-10 不能聚集在线粒体的基质中，此时 JC-10 为单体，可以产生绿色荧光。这样就可以非常方便地通过荧光颜色的转变来检测线粒体膜电位的变化。常用红绿荧光的相对比例来衡量线粒体去极化的比例。
线粒体膜电位的下降是细胞凋亡早期的一个标志性事件。通过 JC-10 从红色荧光到绿色荧光的转变可以很容易地检测到细胞膜电位的下降，同时也可以用JC-10 从红色荧光到绿色荧光的转变作为细胞凋亡早期的一个检测指标。
JC-10 单体的最大激发波长为 515nm ，最大发射波长为529nm;JC-10 聚合物的最大激发波长为585nm ，最大发射波长为590nm 。实际观察时，使用常规的观察红色荧光和绿色荧光的设置即可。
操作步骤（仅供参考）：
阳性对照的设置：
推荐使用10μM CCCP，处理细胞 20 分钟。随后按照下述方法装载 JC-10，进行线粒体膜电位的检测。对于大多数细胞，通常 10μM CCCP 处理 20 分钟后线粒体的膜电位会完全丧失，JC-10 染色后观察应呈绿色荧光；而正常的细胞经 JC-10 染色后应显示红色荧光。对于特定的细胞，CCCP 的作用浓度和作用时间可能有所不同，需自行参考相关文献资料决定。
悬浮细胞：
(1) 取 10～60 万细胞，重悬于 0.5mL 细胞培养液中，细胞培养液中可以含血清和酚红。
(2) 加入 0.5mL 1~5μg/mL JC-10 染色液，颠倒数次混匀。细胞培养箱中37 ℃孵育20 分钟。
(3) 在孵育期间，将缓冲液放置于冰浴中，提前预冷。
(4) 37℃孵育结束后，600g 4 ℃离心 3～4 分钟，沉淀细胞。弃上清，注意尽量不要吸除细胞。
(5) 用缓冲液洗涤 2 次：加入 1mL 缓冲液重悬细胞，600g 4 ℃离心 3～4 分钟，沉淀细胞，弃上清。再加入 1mL 缓冲液重悬细胞，600g 4℃离心 3～4 分钟，沉淀细胞，弃上清。
(6) 再用适量缓冲液重悬后，用荧光显微镜或激光共聚焦显微镜观察，也可以用荧光分光光度计检测或流式细胞仪分析。
贴壁细胞：
注意：对于贴壁细胞，如果希望采用荧光分光光度计或流式细胞仪检测，可以先收集细胞，重悬后参考悬浮细胞的检测方法。
(1) 对于六孔板的一个孔，吸除培养液，根据具体实验如有必要可以用PBS 或其它适当溶液洗涤细胞一次，加入 1mL 细胞培养液。细胞培养液中可以含有血清和酚红。
(2) 加入 1mL 1~5μg/mL JC-10 染色液，充分混匀。细胞培养箱中37℃孵育20 分钟。
(3) 在孵育期间，将缓冲液放置于冰浴中，提前预冷。
(4) 37℃孵育结束后，吸除上清，用缓冲液洗涤2 次。
(5) 加入 2mL 细胞培养液，培养液中可以含有血清和酚红。
(6) 荧光显微镜或激光共聚焦显微镜下观察。
纯化的线粒体：
(1) 0.9mL 0.2~1μg/mL JC-10 染色液中加入 0.1mL 总蛋白量为10～100 μg纯化的线粒体。
(2) 用荧光分光光度计或荧光酶标仪检测：混匀后直接用荧光分光光度计进行时间扫描（timescan），激发波长为 485nm ，发射波长为 590nm 。如果使用荧光酶标仪，激发波长不能设置为485nm时，可以在 475～520nm 范围内设置激发波长。
(3) 用荧光显微镜或激光共聚焦显微镜观察。
荧光观测和结果分析：
检测 JC-10 单体时可以把激发光设置为 490nm ，发射光设置为530nm；检测JC-10聚合物时，可以把激发光设置为 525nm ，发射光设置为 590nm 。
注意：此处测定荧光时不必把激发光和发射光设置在最大激发波长和最大发射波长。如使用荧光显微镜观察，检测 JC-10 单体时可以参考观察其它绿色荧光时的设置，如观察GFP或FITC时的设置；检测 JC-10 聚合物时可以参考观察其它红色荧光，如碘化丙啶或Cy3 时的设置。出现绿色荧光说明线粒体膜电位下降，并且该细胞很可能处于细胞凋亡早期。出现红色荧光说明线粒体膜电位比较正常，细胞的状态也比较正常。
注意事项：
1. JC-10储备液在 4 ℃、冰浴等较低温度情况下会凝固而粘在离心管管底、管壁或管盖内，可以 20～25℃水浴温育片刻至全部融解后使用。
2. 装载完 JC-10 后用缓冲液洗涤时，使缓冲液保持4℃左右，此时的洗涤效果较好。
3. JC-10 探针装载完并洗涤后尽量在 30 分钟内完成后续检测。在检测前需冰浴保存。
4. CCCP 为线粒体电子传递链抑制剂，有毒，请注意小心防护。
5. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
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