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该酶来源于BacillusstearothermophilusDNA
PolymeraseI,通过基因工程手段去除了其5’-3’外切酶活性,
而保留了5’-3’聚合酶活性。该酶具有很强的链置换能力,因
此是Isothermalamplification(LAMP,RT-LAMP)的绝佳用
酶。与野生型BstDNA聚合酶(大片段)相比,该酶在扩
增速度、产量、耐盐性和热稳定性等方面均有大幅提高,同
时,该酶可以使用dUTP作为底物进行扩增(Bst大片段无此
活性)。
应用
1.DNA等温扩增
2.富含GC结构的快速测序
3.微量模板DNA的快速测序
注意事项
(1)Mg2+的使用浓度为4~10mM浓度,IsothermoBuffer中没有Mg2+,通常情况下,在6-8mMMg2+条件下可获得较好的LAMP结果。
(2)有文献报道加入TteUvrd解旋酶可改善LAMP的效果。
(3)使用无模板DNA作为对照检测扩增的特异性。