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RTaseIIIPrimerFlexibleAll-in-OneMix是一款高效、便捷、减少污染的高质量一链cDNA合成预混液,包含M-MLVGIIIReverseTranscriptase及其反应Buffer、RNA酶抑制剂、dNTPs等一链cDNA合成所需的多种组分,还需加入RNA模板、引物和水即可开始反应,操作非常方便。针对不同实验设计可灵活使用不同类型的逆转录引物,满足多样化的实验需求,可根据不同实验场景选择Oligo(dT)20VN或Randomhexamers或GeneSpecificPrimers。使用该逆转录预混液15分钟内最长可获得12kb大小的cDNA。
从细胞中提取的RNA往往存在基因组DNA污染,如果逆转录前不将其去除,下游qPCR反应时基因组DNA与cDNA会同时被扩增(尤其当引物设计在同一外显子上时),从而影响基因表达定量准确性。本试剂盒采用dsDNase高效去除基因组DNA污染,dsDNase能够特异性消化双链DNA(dsDNA或DNA-RNA杂合链中的DNA链),并且具有热敏感性,在逆转录温度下即可快速不可逆地失活。与传统使用DNaseI去除基因组DNA污染的方法相比,dsDNase无需额外加入EDTA进行失活,不仅节省实验时间,而且降低了对逆转录反应的抑制。