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与Bst2.0DNA聚合酶和BstDNA聚合酶大片段相比,Bst3.0DNA聚合酶具有更佳的等温扩增活性和更强的逆转录活性。无论以DNA还是RNA为模板,该酶都具有5’-3’的DNA聚合酶活性和强烈的链置换活性,但该酶5’-3’和3’-5’的外切酶活性缺失。
在以RNA为模板的LAMP实验中,可实现单酶系统反应。该酶在60-65°C之间具有很好的反转录活性,可有效解决具有二级复杂结构的RNA模板的反转录,而Bst2.0DNA聚合酶和BstDNA聚合酶大片段无此活性。
注意事项
(1)Mg2+的使用浓度为4~10mM浓度,IsothermoBuffer中没有Mg2+,通常情况下,在6-8mMMg2+条件下可获得较好的LAMP结果。
(2)有文献报道加入TteUvrd解旋酶可改善LAMP的效果。
(3)使用无模板DNA作为对照检测扩增的特异性。