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All-in-OneFirst-StrandSynthesisMasterMix(withdsDNase)是一款高效、便捷、减少污染的高质量一链cDNA合成试剂盒,包含热稳定的M-MLVGIIIReverseTranscriptase及其反应Buffer、RNA酶抑制剂、dNTPs、Oligo(dT)20VN和随机引物等一链cDNA合成所需的所有组分,仅需加入RNA模板和水即可开始反应。使用该逆转录试剂盒获得的cDNA主要用于下游qPCR实验。
从细胞中提取的RNA往往存在基因组DNA污染,如果逆转录前不将其去除,下游qPCR反应时基因组DNA与cDNA会同时被扩增(尤其当引物设计在同一外显子上时),从而影响基因表达定量准确性。本试剂盒采用dsDNase高效去除基因组DNA污染,dsDNase能够特异性消化双链DNA(dsDNA或DNA-RNA杂合链中的DNA链),并且具有热敏感性,在逆转录温度下即可快速不可逆地失活。与传统使用DNaseI去除基因组DNA污染的方法相比,dsDNase无需额外加入EDTA进行失活,不仅节省实验时间,而且降低了对逆转录反应的抑制。
可依据基因组污染严重程度选择采用去基因组DNA污染与逆转录分开进行的操作方法,或者去基因组污染与逆转录一步法进行的操作方法。