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使用方法(以 IgG 为例,仅供参考)
IgG 还原
为了获得更好的标记效果,抗体溶液推荐 1 mg/mL,如果低于 1 mg/mL,则应浓缩抗体。抗体还原可以在磷酸盐缓冲液中进行。还原剂种类、浓度、孵育时间可参考相应文献。
纯化后,需进行还原抗体浓度的测定。
注:还原抗体不稳定,最好纯化后立即进行偶联反应。
标记步骤(仅供参考)
1. 以预活化染料:还原抗体=0.5:1(质量比)的比例,将还原后的抗体添加到预活化的染料管中。
注意:预活化 PerCP-Cy5.5 染料 1 mg 规格建议一次性使用完毕,即若抗体溶液浓度为 1 mg/mL,按照 0.5:1 的质量比,则需要 2000 μL 的抗体溶液加入到预活化染料。
2. 室温(20-25℃)避光摇晃孵育 4 h。
3. 封闭抗体上游离的巯基,需参考文献资料。
4. 使用体积排阻色谱法纯化抗体/PerCP-Cy5.5 偶联物溶液。
注:如长期保存,需加抗体保存液。
注意事项
1. 标记不同的抗体,所需染料与抗体的标记比例可能不同,当排除抗体质量、标记步骤等其他可能影响标记结果的因素后,可考虑降低抗体质量来达到较好的标记效果。
2. 荧光染料均存在淬灭,请注意避光,以减缓荧光淬灭。
3. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。