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7-AAD是一种非渗透性的核酸荧光染料。该染料不能透过活细胞的细胞膜,但可穿透膜损伤细胞如晚期凋亡细胞或者坏死细胞的细胞膜并与其内的DNA结合,可用来区分存活的早期细胞和坏死或晚期凋亡细胞,广泛用于流式细胞仪。
7-AAD与DNA结合后可发出强烈的荧光,其荧光特性与PI相似,可被488 nm氩离子激光激发,但其发射光谱较PI窄,且发射波长更长,对其他检测通道的干扰更小,在多色荧光分析中是PI的最佳替代品,可与多种488激发光激发的荧光染料联合使用,如FITC,PE等。
使用方法(仅供参考)
通常7-AAD染色的染色在细胞染色的后一步,并且它只能染死细胞。 以下程序适用于大多数细胞类型。 生长培养基,细胞密度,细胞类型和其他因素可能会影响染色。玻璃器皿上的残留洗涤剂也可能影响许多生物的染色,导致在没有细胞存在的溶液中出现明亮染色的物质。
1)使用适合您样品的固定方案。
2)通过离心沉淀细胞,并将细胞重悬于缓冲盐溶液或培养基中,在pH 7.4下进行染料染色。 培养物中的贴壁细胞可以在盖玻片上或细胞培养孔中原位染色。
3)使用0.5~5μM的浓度添加7-AAD染色,并孵育15~60min。
4)在Ex/Em =545/650nm处测量荧光强度(使用FL3进行流式细胞分析)
注意:7-AAD是一种潜在的致癌物质。 建议用户戴上手套,防护服和眼睛/面部保护装置,以免接触皮肤和眼睛。