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Cy7 (Cyanine 7) 是一种近红外花青素荧光染料。由于它的荧光波长(Em:770nm)恰好处于肌体组织近红外窗口 I 的区域,所以Cy7常常应用于小动物活体体内成像中。Cy7荧光肉眼不可见,并且显微镜观察时需要近红外滤片,很多荧光显微镜(包括共聚焦显微镜)并不配备,但是流式细胞仪常常配备Cy7滤片组。Cy7是常用荧光染料,Cy7可以用来标记核酸,蛋白,抗体,多肽等,它是常见的小动物显影剂之一。
NHS活化酯(N-羟基琥珀酰亚胺酯,N-hydroxysuccinimide ester,succinimidyl ester)是生物标记反应中常用的活化基团。它活化Cy7分子中的羧基,让它可以和目标生物分子上的胺基(伯胺或者仲胺)反应生成稳定的酰胺键,从而把Cy7分子标记到生物大分子上。由于游离胺基是蛋白,抗体,多肽表面的常见官能团(来自于赖胺酸侧链),Cy7-NHS可以和它们直接反应。核酸分子中天然不带游离胺基,只有胺基修饰过的RNA或者DNA才可以和Cy7-NHS反应。另外,Cy7-NHS也可以标记聚合物胺基,纳米粒表面胺基等。
* 注意事项:
1)NHS ester基团对湿度比较敏感,务必干燥保存产品。使用前产品需放到室温回温至少20分钟。
2)使用不含氨基的缓冲体系。比如PBS,Hepes,碳酸氢钠缓冲液或硼酸缓冲液等。不要使用任何含伯胺或仲胺的缓冲液,比如Tris,甘氨酸等。高浓度咪唑也会影响反应。
3)标记反应不建议放在强光下。