甘油-3-磷酸氧化酶(Glycerol-3-phosphate oxidase,GPO,EC 1.1.3.21),是一种存在于细胞质中的酶,主要参与脂肪代谢途径中的一部分,被称为甘油磷酸途径。甘油磷酸氧化酶(GPO)将甘油磷酸氧化为磷酸二羟丙酮,并产生过氧化氢,在α-甘油磷酸脱氢酶作用下,NADH和磷酸二羟丙酮生成α-磷酸甘油和NAD+,引起340nm处的吸光度下降。通过测定NADH的变化,计算甘油-3-磷酸氧化酶活性。