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产品介绍
全体系冻干微球恒温扩增系列的产品使得诊断试剂的稳定性、易用性、运输便利性大幅提升。全体系恒温冻干微球采用专有的微球冻干工艺制备,品型均一、不易碎、长效储存、避免冷链运输。对于开发诊断试剂盒,可将引物烘干于EP反应管底部,加入一粒冻干微球后即可成为全扩增体系的冻干制品,因此试剂性能更加稳定、便于保存和运输。
该制品为全体系冻干微球制品,内含恒温扩增所用 的低缓冲盐(Low Salt)、Mg2+、dNTP、Bst 4.0 DNA/RNA 聚合酶等。由于 LAMP 在反应时会产生大量的 H+,导致 反应体系 pH 下降,因此,低缓冲盐体系条件下,可搭配 pH 敏感染料实现可视化检测 LAMP 检测。该制品中包含 终浓度 25µM (25 µl 溶解体积)的 Tris(pH8.8)缓冲盐。
注意事项
(1)红黄变色反应依赖于反应体系中 pH 的变化来实现,因此模板中 Tris 盐、NaOH 等成分对反应有至关重要的影响。在采用核酸纯化的样本检测时,推荐使用 ddH2O进行洗脱。
(2)关于 DEPC 水使用的特殊说明:由于 DEPC 处理过的 ddH2O 显示很强的酸性,会直接导致溶解后的冻干球成黄色。所以 DEPC 处理过的 H2O 必须经 NaOH 溶液调整 pH 到 8.0-9.0 后方可使用。我们推荐直接使用,水机制备的 18.2ΩH2O,不影响 RNA 样本的扩增。
(3)在对粗制样本进行检测时,最佳的粗制样本为拭孖样本,拭孖样本经 ddH2O 浸泡后,可以直接使用浸泡液作为模板进行扩增,无需核酸纯化步骤。
(4)关于LAMP成品试剂的建议,Lyo Bst 4.0 LS IsoAmp冻干球和红色 pH 指示染料管均为室温稳定状态,可长期保存。将扩增引物与 10x 红色 pH 指示染料(产品内有赠送)混合后,于 70°C 烘干,并加入一粒冻干球即可制备成全体系检测试剂。另一种方法,可将检测引物与液体态试剂一起做成冻干球,并加入到红色 pH 指示染料管中即可。具有开发经验的人员,可自行优化相应的 pH染料,来搭配该低盐的 LAMP 反应冻干微球。