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D-虫荧光素(D-Luciferin)是萤火虫荧光素酶底物，其量子效率为0.88，是Luminol的20倍。反应原理：首先，在镁离子存在下荧光素酶使荧光素与ATP反应，接着它被氧化形成二氧杂环丁烷结构并发出黄绿色的光。Luciferin-luciferase发光用于ATP监控以测定细胞活力以及细菌计数。它还用于报告基因检测。可与小动物活体成像系统配套使用，用于标记LUC基因后的体内活体荧光检测。
应用:
(1) 体外分析
(2) 活体成像分析
(3) 高灵敏度ATP分析
使用方法:
1. 活体成像分析方法
(1) 用DPBS(w/o Mg2+ 、Ca2+ )配置D-Luciferin工作液(15mg/mL，超声助溶)* ，0.2 μm滤膜无菌过滤。
(2) 注射量：10μL/g的体重，如10g 重小鼠，注射100μL 工作液(1.5 mg D-Luciferin)。
(3) 腹腔注射10～15分钟后，上机进行图像分析。
2. 体外分析方法
(1) 用无菌水配置200×
的D-Luciferin储备液(30mg/mL，超声助溶)*，立即使用，或-20℃保存。
(2) 用预热好的完全培养基1∶200稀释D-Luciferin储备液，配置工作液(150μg/mL)。
(3) 去除培养细胞的培养基。
(4) 进行图像分析前，向细胞中添加1×
的D-Luciferin工作液，进行图像分析**。
(5)：溶解D-Luciferin时要完全。
(6)：在图像分析前，将细胞进行37℃的短时间培养可以增加信号强度。
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D-虫荧光素游离酸(D-Luciferin, free acid)、D-虫荧光素钾盐(D-Luciferin,
potassium salt)和D-虫荧光素钠盐(D-Luciferin, sodium salt)，钾盐、钠盐的形式是最通用的，因为它们都易溶于水。钾盐也是活体动物检测使用的主要形式。它们的激发和发射波长分别为328nm和533nm。
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