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产品简介
T4 DNA Ligase(Fast) 由携带 T4 噬菌体 gene 30 的大肠杆菌产生。该酶催化双螺旋 DNA 或 RNA 之间的5'-磷酸基团和3'-羟基之间形成磷酸二酯键。该酶在双链DNA、RNA或者DNA/RNA复合物间可修复单链缺刻 , 并且可以连接有粘性末端或者平末端的DNA片段,但对于单链核酸无活性,主要用于限制性内切酶酶切产物DNA片段克隆、基因定点突变与 PCR产物克隆、线性DNA自环化与修复双链DNA缺刻。T4 DNALigase(Fast) 需要ATP作为辅助因子,在室温下完成粘性末端连接反应仅需10分钟。
酶活单位定义
37℃条件下,1 Weiss unit的酶在20 min内催化1 nmol的[32 PPi]转变为活性炭吸附态。1 Weiss unit等同于约200个粘性末端连接反应单位(CEU),相当于在16℃条件下,30 min内连接50% HindIII 消化后的 λDNA 片段。
酶活检测条件
酶活在如下反应混合物中进行测试:66mM Tris-HCl (pH7.6),6.6
mM MgCl2 ,66μM ATP,10mM DTT,3.3μM [32PPi]。"