| 基本信息： | 英文名称：Mouse Peripheral Blood Neutrophil Isolation (Plus) Kit 中文名称：小鼠外周血中性粒细胞分离（Plus）试剂盒 规格：200ml/Kit 储存条件：Store at 2-8℃，2 years |
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产品简介：
同常规试剂盒相比，本试剂盒通过优化分离液相关成分，进一步提高了小鼠外周血中性粒细胞的分离纯度，更适用于流式细胞仪分选等下游实验操作。
产品组成：
试剂盒组分 | 规格 | 保存条件 |
试剂A | 200mL | 2~8℃ |
试剂B | 100mL | 2~8℃ |
鼠红细胞沉降液 | 100mL | 室温 |
红细胞裂解液 | 100mL | 室温 |
细胞洗涤液 | 200mL | 室温 |
操作步骤：(仅供参考)
1、 沉降去除红细胞：取新鲜抗凝血与血液稀释液(注射用生理盐水或1XPBS)及红细胞沉降液按照1:1:1比例混匀，室温下静置30-40min后，可见红细胞沉于试管底部，小心吸尽上清层(富含白细胞及血小板)用于后续细胞分离。
2、 样本分离：在15mL离心管中先加入4mL试剂A，后将2mL试剂B沿管壁缓慢叠加（45°倾斜试管）于试剂A之上，形成梯度界面，将沉降后上清小心平铺于分离液液面上方。（注意分离液与样本总体积不能超过离心管的三分之二，否则会影响分离效果。）
3、 室温条件下水平转子600-1000g，25-30minutes(血液体积越大所需离心力越大,离心时间越长,最佳分离条件需摸索，离心最大转速不超过1000g)。
4、 离心后，上层白膜层为单个核细胞层，下层白膜层为粒细胞层。
5、小心吸取粒细胞层至新的离心管中，加入10mL细胞洗涤液洗涤细胞。250g，离心10min（如有红细胞污染可依据样本体积加入适量红细胞裂解液祛除污染）。
6、 弃上清，加入5mL细胞清洗液重悬细胞，250g，离心10min。
7、 弃上清，重悬细胞备用。
注意事项：
A.开封前颠倒混匀，本分离液为无菌产品，为延长分离液保存时间，请在无菌条件下启封，避免微生物污染。
B.请根据实验需要预先无菌分装分离液试剂，并在其恢复至室温（18℃~25℃）后使用，如室内温度较低，可将分离液预热。4℃或者是
温度较低的条件下离心，可能会导致白膜层不清晰。
C.血液样本最好为新鲜抗凝血（采血2h以内），为保持中性粒细胞的活性，应避免冷冻和冷藏。
D.稀释血液或洗涤细胞，不可使用含Ca、Mg离子的缓冲液及培养液，其成分会导致血细胞凝集，大大降低细胞得率及纯度。
E.部分塑料制品（如聚苯乙烯）因其带有的静电作用，可能会导致细胞挂壁，影响分离效果。
F.血液样本的粘稠度或者是温度差异，可能会影响分离效果，可以调节离心转数和离心时间，摸索最佳的分离条件。
G.如果要进一步对分离的细胞进行培养，注意全程保持无菌操作，避免微生物污染。
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